Trosglwyddo egni cyseiniant fflworoleuedd (FRET)
Mae trosglwyddo ynni cyseiniant fflworoleuedd (FRET) yn broses trosglwyddo ynni nad yw'n ymbelydrol lle mae egni cyflwr cyffrous y rhoddwr yn cael ei drosglwyddo i gyflwr cynhyrfus y derbyniwr trwy ryngweithio cyplau trydan rhyngfoleciwlaidd.Nid yw'r broses hon yn cynnwys ffotonau ac felly nid yw'n ymbelydrol.Mae gan yr assay hwn fanteision bod yn gyflym, yn sensitif ac yn syml.
Gall y lliw a ddefnyddir yn yr assay FRET fod yn union yr un fath.Ond yn y rhan fwyaf o gymwysiadau, defnyddir lliwiau gwahanol mewn gwirionedd.Yn gryno, trosglwyddo egni cyseiniant luminous yw trosglwyddo pâr o deupolau o'r rhoddwr (lliw 1) i'r derbynnydd (lliw 2) pan fydd y grŵp rhoddwr yn gyffrous.Yn gyffredinol, mae sbectrwm allyriadau'r grŵp fflworoffor Rhoddwyr yn gorgyffwrdd â sbectrwm amsugno'r grŵp Derbynnydd.“Pan fo’r pellter rhwng y ddau fflworoffor yn briodol (10 - 100 A), gellir arsylwi ar drosglwyddo egni fflworoffor o’r rhoddwr i’r derbynnydd.”Mae'r dull o drosglwyddo egni yn dibynnu ar strwythur cemegol y derbynnydd:
1. Yn cael ei drawsnewid yn dirgryniad moleciwlaidd, hynny yw, mae golau luminous trosglwyddo ynni yn diflannu.(Mae'r derbynnydd yn quencher ysgafn)
2. Mae'r allyriad yn ddwysach na'r derbynnydd ei hun, gan arwain at redshift yn y sbectrwm fflworoleuedd eilaidd.”(Mae derbynyddion yn allyrwyr goleuol).
Mae'r grŵp rhoddwyr (EDANS) a'r genyn derbyniwr (DABCYL) wedi'u cysylltu'n unffurf â swbstrad naturiol proteas HIV, a phan nad yw'r swbstrad wedi'i ddatgysylltu, gall DABCYL quenle EDANS ac yna dod yn anghanfyddadwy i fflworin.Ar ôl datgysylltu proteas HIV-1, nid yw EDANS bellach yn cael ei ddiffodd gan DABCYL, a gellir canfod EDANS luciferases wedyn.Gellir monitro argaeledd atalyddion proteas trwy newidiadau yn nwysedd fflworoleuedd EDANS.
Mae peptidau FRET yn offer cyfleus i astudio amhenodolrwydd peptidase.Gan y gellir monitro ei broses adwaith yn barhaus, mae'n darparu dull cyfleus ar gyfer canfod gweithgaredd ensymau.Mae'r sglein a gynhyrchir ar ôl hydrolysis bondiau peptid gan y rhoddwr/derbynnydd yn darparu mesur o actifedd ensymau mewn crynodiadau nanomolar.Pan fydd y peptid FRET yn gyfan, mae'n dangos diflaniad sydyn o'r fflach fewnol, ond pan fydd unrhyw fond peptid gyferbyn â'r rhoddwr / derbynnydd yn torri, mae'n rhyddhau fflach, y gellir ei ganfod yn barhaus ac yna gellir mesur gweithgaredd yr ensymau.
Amser post: Awst-14-2023