Y mwyaf tueddol o fethiannau ac atebion HPLC

Fel offeryn manwl uchel, gall HPLC arwain yn hawdd at rai problemau bach trafferthus os na chaiff ei weithredu yn y ffordd gywir yn ystod y defnydd.Un o'r problemau mwyaf cyffredin yw'r broblem cywasgu colofn.Sut i ddatrys problemau cromatograff diffygiol yn gyflym.Mae system HPLC yn bennaf yn cynnwys potel cronfa ddŵr, pwmp, chwistrellwr, colofn, siambr tymheredd colofn, synhwyrydd a system prosesu data.Ar gyfer y system gyfan, y pileri, pympiau a synwyryddion yw'r cydrannau allweddol a'r prif leoliadau sy'n agored i broblemau.

Yr allwedd i bwysau colofn yw'r maes sydd angen sylw manwl wrth ddefnyddio HPLC.Mae cysylltiad agos rhwng sefydlogrwydd pwysedd colofn a siâp brig cromatograffig, effeithlonrwydd colofn, effeithlonrwydd gwahanu ac amser cadw.Nid yw sefydlogrwydd pwysedd colofn yn golygu bod y gwerth pwysedd yn sefydlog ar werth sefydlog, ond yn hytrach bod yr ystod amrywiad pwysau rhwng 345kPa neu 50PSI (gan ganiatáu ar gyfer defnyddio elution graddiant pan fydd pwysedd y golofn yn sefydlog ac yn newid yn araf).Mae pwysedd rhy uchel neu rhy isel yn broblem pwysedd colofn.

Y mwyaf tueddol o fethiannau ac atebion HPLC

1, pwysedd uchel yw'r broblem fwyaf cyffredin yn y defnydd o HPLC.Mae hyn yn golygu cynnydd sydyn mewn pwysau.Yn gyffredinol, mae'r rhesymau canlynol: (1) Yn gyffredinol, mae hyn oherwydd rhwystr sianel llif.Ar y pwynt hwn, dylem ei archwilio fesul tipyn.a.Yn gyntaf, torrwch gilfach y pwmp gwactod i ffwrdd.Ar y pwynt hwn, cafodd y tiwb PEEK ei lenwi â hylif fel bod y tiwb PEEK yn llai na'r botel toddydd i weld a oedd yr hylif yn diferu ar ewyllys.Os nad yw'r hylif yn diferu neu'n diferu'n araf, mae pen hidlo'r toddydd wedi'i rwystro.Triniaeth: Mwydwch 30% o asid nitrig am hanner awr a rinsiwch â dŵr pur iawn.Os yw'r hylif yn diferu ar hap, mae'r pen hidlo toddydd yn normal ac yn cael ei wirio;b.Agorwch y falf Purge fel nad yw'r cyfnod symudol yn mynd trwy'r golofn, ac os na chaiff y pwysau ei leihau'n sylweddol, mae pen gwyn yr hidlydd wedi'i rwystro.Triniaeth: Filtered whiteheads eu tynnu a sonicated gyda isopropanol 10% am hanner awr.Gan dybio bod y pwysedd yn disgyn o dan 100PSI, mae'r pen gwyn wedi'i hidlo yn normal ac yn cael ei wirio;c.Tynnwch ben allanfa'r golofn, os nad yw'r pwysau'n lleihau, mae'r golofn wedi'i rhwystro.Triniaeth: Os yw'n rhwystr halen byffer, rinsiwch 95% nes bod y pwysedd yn normal.Os yw'r rhwystr yn cael ei achosi gan ddeunydd mwy cadwedig, dylid defnyddio llif cryfach na'r cyfnod symudol presennol i ruthro tuag at bwysau arferol.Os na fydd y pwysau glanhau hirdymor yn gostwng yn ôl y dull uchod, gellir ystyried bod mewnfa ac allfa'r golofn yn gysylltiedig â'r offeryn i'r gwrthwyneb, a gellir glanhau'r golofn gyda'r cyfnod symudol.Ar yr adeg hon, os nad yw pwysedd y golofn yn dal i gael ei leihau, dim ond plât rhidyll mynediad y golofn y gellir ei ddisodli, ond unwaith nad yw'r llawdriniaeth yn dda, mae'n hawdd arwain at leihau effaith y golofn, felly ceisiwch ddefnyddio llai.Ar gyfer problemau anodd, gellir ystyried ailosod colofnau.

(2) Gosodiad cyfradd llif anghywir: Gellir ailosod y gyfradd llif gywir.

(3) Cymhareb llif anghywir: mae'r mynegai gludedd o wahanol gyfrannau o lif yn wahanol, ac mae pwysedd system cyfatebol y llif â gludedd uwch hefyd yn fwy.Os yn bosibl, gellir disodli neu ail-osod a pharatoi toddyddion gludedd is.

(4) Drifft sero pwysedd y system: addaswch sero y synhwyrydd lefel hylif.

2, mae'r pwysau yn rhy isel (1) fel arfer yn cael ei achosi gan ollyngiadau system.Beth i'w wneud: Dod o hyd i bob cysylltiad, yn enwedig y rhyngwyneb ar ddau ben y golofn, a thynhau'r ardal gollwng.Tynnwch y postyn a thynhau neu leinio'r ffilm PTFE gyda grym priodol.

(2) Mae'r nwy yn mynd i mewn i'r pwmp, ond mae'r pwysau fel arfer yn ansefydlog ar yr adeg hon, yn uchel ac yn isel.Yn fwy difrifol, ni fydd y pwmp yn gallu amsugno'r hylif.Dull triniaeth: agorwch y falf glanhau a'i lanhau ar gyfradd llif o 3 ~ 5ml/munud.Os na, roedd swigod aer yn cael eu hallsugno wrth y falf wacáu gan ddefnyddio tiwb nodwydd pwrpasol.

(3) Dim all-lif cam symudol: gwiriwch a oes cam symudol yn y botel gronfa ddŵr, p'un a yw'r sinc yn cael ei drochi yn y cyfnod symudol, ac a yw'r pwmp yn rhedeg.

(4) Nid yw'r falf gyfeirio ar gau: mae'r falf gyfeirio ar gau ar ôl arafu.Fel arfer mae'n mynd i lawr i 0.1.~ 0.2mL / min ar ôl cau'r falf cyfeirio.

Crynodeb:

Yn y papur hwn, dim ond problemau cyffredin mewn cromatograffaeth hylif sy'n cael eu dadansoddi.Wrth gwrs, yn ein cais ymarferol, byddwn yn dod ar draws mwy o broblemau eraill.Wrth drin namau, dylem ddilyn yr egwyddorion canlynol: dim ond un ffactor sy'n newid ar y tro i bennu'r berthynas rhwng y ffactor damcaniaethol a'r broblem;Yn gyffredinol, wrth ailosod rhannau ar gyfer datrys problemau, dylem dalu sylw i roi'r rhannau cyfan sydd wedi'u datgymalu yn ôl yn eu lle i atal gwastraff;Ffurfio arfer record dda yw'r allwedd i lwyddiant trin diffygion.I gloi, wrth ddefnyddio HPLC, mae'n bwysig rhoi sylw i pretreatment sampl a gweithrediad priodol a chynnal a chadw yr offer.